Problemi di sigillatura e contaminazione nelle piastre di coltura cellulare multi -well

Caricamento e gestione di piastre di coltura cellulare multi-pozzo:

La piastra di coltura cellulare segue anche il principio della rigorosa asepsi quando si eseguono operazioni cellulari. Tutte le operazioni devono essere standardizzate e scientifiche e non causano ulteriore impatto sulla crescita cellulare. Il problema più comune è come garantire l'uniformità delle cellule dopo aver aggiunto il campione e minimizzare l'impatto del cambiamento del mezzo sullo stato di crescita delle cellule.

chiedere:
Le palpebre di piastre di coltura o piatti di Petri da 96 e 24 pozzetti sono molto sciolti, il che è conveniente per la ventilazione, ma anche batteri, muffe e altri inquinanti?

risposta:
Il coperchio è molto sciolto, che appartiene alla cultura semi-aperta, e lo scopo è ventilare (in effetti, è quello di fare la CO2 al di fuori del piatto di cultura completamente scambiarsi con il piatto di cultura e mantenere il valore del pH della cultura medio).
Tutto ha vantaggi e svantaggi, che ovviamente aumenta la possibilità di inquinamento. Inoltre, ciò provoca evaporare il liquido nel piatto, il che è notevole per un dosaggio preciso delle droghe. Pertanto, sono necessarie le seguenti due misure: a. L'aria nell'incubatore deve essere pulita (normale luce ultravioletta, lavaggio alcolico e l'incubatrice deve essere aperta e chiusa il meno possibile) b. L'umidità nell'incubatore deve essere sempre mantenuta al 100% (il lavandino con acqua distillata sterile posizionata nell'incubatrice).
Proprio come una piastra di Petri, è anche un contenitore con un coperchio sottosopra e non sarà inquinato. Principalmente a causa della pressione negativa del flusso d'aria generato dal bordo "L" della copertura, ci sono microrganismi attaccati alla polvere e la polvere trasportata dal flusso d'aria non può passare attraverso il bordo del coperchio che genera una pressione negativa. L'effetto di ventilazione è solo attraverso la diffusione dell'aria e non verrà generato alcun flusso d'aria, quindi respiri solo e non penetrerà nei batteri.

chiedere:
Usando una piastra da 24 pozzetti, ci sono operazioni in alcuni pozzi (nella panchina ultra-pulita) e ci sono cellule da coltivare in altri pozzi. Sono preoccupato che ciò causerà contaminazione. Non so cosa prestare attenzione?

risposta:
Se l'operazione è standardizzata nella panchina ultra pulita, dovrebbe essere OK. Penso che tu possa sfruttare appieno la copertura della piastra di coltura, provare a esporre solo i fori da gestire e coprire gli altri fori con le copertine.
Prendi in considerazione in modo completo prima dell'uso e sfruttare appieno tutti i fori; Se devi solo usare alcuni fori, puoi usare solo un lato e coprire il resto con una copertura. Sono abituato a usare prima il foro destro (è conveniente aggiungere campioni alla mano destra).

Quando si opera, utilizzare alcune vetrini per allevare un lato della scheda, non aprire completamente il coperchio, generalmente nessun problema.
Distribuzione e soluzioni irregolari

chiedere:
Le cellule sono inoculate sulla piastra di coltura e le cellule si radunano sempre nella parte periferica, come affrontarla?

risposta:
Posso chiederti come le tue cellule sono miscelate? Sta pitrellando o scuotendo la piastra di coltura? Se è quest'ultimo, e se viene scosso in un cerchio, è molto probabile che le cellule vengano gettate alla parte periferica a causa della forza centrifuga, con conseguente minor numero di cellule nel mezzo. Più di quattro settimane!
Ecco un buon modo: prima di coltivare il piatto di semi, mettere la piastra di coltura nell'incubatrice per alcune ore di saturazione e poi eliminarlo. La forza dovrebbe essere leggera quando si pianta le cellule. L'aggiunta lentamente consente alla sospensione cellulare di fluire nei pozzi della piastra e le cellule coltivate crescono sostanzialmente uniformemente. Ricorda di non scuotere mai con uno shaker o le tue cellule si raggruppano come hai detto.
Più piccolo è il diametro del foro della piastra di coltura, più è ovvio questo fenomeno. Questo fenomeno è inevitabile per piastre a 24 e 96 pozzetti, perché il liquido aderisce al muro in modo che la soluzione di coltura nel pozzo non formino un livello liquido, ma la periferia è alta, proprio come uno specchio concavo. Tuttavia, quando si utilizzano questi due tipi di piastre di orifizio, non è possibile aggiungere una quantità sufficiente di soluzione di coltura a causa della necessità di un ulteriore intervento, in modo che le cellule appaiano "Collezione dei bordi" insieme alla soluzione di coltura. Dipende da quali indicatori devi osservare. Se è MTT, l'immunoistochimica influenzerà i risultati dovuti alla stratificazione cellulare.
Quando si digeriscono le cellule, prestano attenzione alla pipettatura uniforme per evitare i ciuffi cellulari e la quantità di soluzione di coltura nel pozzo dovrebbe essere sufficiente. Generalmente, aggiungi una soluzione di coltura sufficiente durante l'inoculazione e modifica la soluzione una volta quando si aggiunge un intervento. La quantità di soluzione di coltura aggiunta alla soluzione di intervento è uguale alla quantità di soluzione di coltura al momento dell'inoculazione, in questo caso, il fenomeno di "set di bordi" sarà migliorato, quindi potresti anche provarlo.

chiedere:
Quello che ho fatto è stato l'esperimento di formazione della placca. È meglio diffondere le cellule in uno strato uniforme. La maggior parte dei fori va bene quando il virus è inoculato e alcuni di essi non sono uniformi. Ci sono grandi differenze nel gruppo cellulare. Vorrei chiederti quale metodo usi quando aggiungi celle?

risposta:
È fondamentale per pipette le celle in una sospensione a cellula singola dopo la digestione! Assicurati che il numero di celle in ciascun pozzetto sia coerente quando si dividi la piastra!
Naturalmente, ci sono anche fattori di elaborazione. Anche il parallelismo tra i pozzi è molto importante. Ad esempio, quando si aggiunge medicine, mescolare la medicina dopo diluizione per assicurarsi che la concentrazione di ciascun pozzetto sia coerente!
Inoltre, quando si aggiungono cellule e farmaci, il gruppo di test e il gruppo di controllo dovrebbero essere aggiunti a loro volta per evitare la differenza nella densità cellulare e nella concentrazione di farmaci causata dalla sequenza di aggiunta di campioni!

chiedere:
Il soffio è già uniforme, ma la tavola, 6 buche e 24 buche sono sempre un po 'irregolari e un po' concentrati nel mezzo. Inoltre, è ovvio che il conteggio è fatto e dopo un giorno o due, la densità di ogni foro è diversa, il che influenzerà il rilevamento. C'è un buon modo?

risposta:
Se usi una pipetta Pasteur, non succhiare troppo ogni volta, perché le celle nella pipetta affonderanno automaticamente, spesso il numero di celle nei primi fori è grande e la sospensione cellulare è spesso uniforme e il liquido lo farà Segui il percorso a forma di S.
Se si utilizza una pipetta, le punte devono essere elaborate e rimosse per evitare di danneggiare le celle, in modo che ogni volta che viene preso il liquido corrisponde a un pozzo. È più accurato aggiungere un foro uno a uno con la punta. Ma presta anche attenzione alla miscelazione della sospensione.

Per impostare un gruppo parallelo, n deve essere abbastanza grande (puoi calcolarlo).

Non agitare dopo la placcatura, poiché il tremolio causerà l'aggregazione delle cellule verso il centro. È meglio tamponare una volta.

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